Lumat3 LB 9508超灵敏管式发光仪

化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象，可以分为直接发光和间接发光。

直接发光是最简单的化学发光反应，有两个关键步骤组成：即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质，反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*，处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体，此过程中由于C直接参与反应，故称直接化学发光。 间接发光又称能量转移化学发光，它主要由三个步骤组成：首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体)；当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体)，使F被激发而跃迁至激发态F*；最后，当F*跃迁回基态时，产生发光。

德国Berthold公司生产的Lumat3 LB 9508超灵敏管式发光仪配备两个加样器。适用所有闪光型和辉光型型化学发光检测应用，具体应用如下。

1、单报告基因和双报告基因检测

2、免疫检测

3、ATP 检测

4、DNA 探针检测

5、Phagocyte 功能检测

6、PCR 产物定量

7、各种化学发光临床诊断试剂盒

化学发光检测应用实例

应用实例 双荧光素酶报告基因测试

一、在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统，结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速，灵敏，简便。系统还提供PLB裂解液，用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞，不需操作单个样品。

二、荧火虫和海洋腔肠荧光素酶都具有生物发光报告基因的卓越的测试特点，但它们在进化上的起源不同，因此，具有不同的酶学结构和底物要求。这些差别用来发展了DLR 测试化学，选择性地区别这两种发光报告基因的活力。萤火虫荧光素酶是一个61kDa单亚基蛋白质，酶活力不需翻译后修饰，在翻译后即可作为遗传报告基因。在ATP，Mg2+ 和 O2存在下，通过甲虫荧光素的氧化反应发光（图1）。在常规反应条件下，荧光素的氧化发生时，以荧光素-AMP作为中间体，转换非常缓慢。结果，在底物和酶混合后，测试化学产生“闪烁”的光，并迅速衰减。专利化的测试试剂，定量萤火虫荧光素酶活力，掺入了辅酶A（CoA）， 增强快速酶转换来提高反应动力学， 导致持续的“闪烁”发光信号 （图2） 。

海洋腔肠荧光素酶，一个36kDa单亚基蛋白质，纯化自天然来源的Renilla reniformis，含有3%的碳水化合物，但是和萤火虫荧光素酶一样，酶活力不需翻译后修饰，在翻译后即可作为遗传报告基因。海洋腔肠荧光素酶所催化的发光反应，利用O2和海样腔肠荧光素（coelenterazine）（图1）。

当用DLR测试化学作实验时，海洋腔肠荧光素酶反应的动力学产生闪烁型发光信号，在检测过程中缓慢地衰减（图2）。在DLR测试系统中，用单个裂解液分步测定萤火虫和海洋腔肠荧光素酶活力。在完成萤火虫荧光素酶活力（“实验”报告基因）的测定后，萤火虫发光被快速湮灭，并同时激活海洋腔肠荧光素酶的发光反应（“对照” 报告基因）。因此，DLR测试系统整合了两个测试化学，对共表达的两个报告基因作快速地定量，酶来自转染细胞裂解液，或无细胞转录翻译反应。萤火虫荧光素酶测试的线性范围延伸达酶浓度的8个数量级，可测定≤1fg （大约10 -20 摩尔）的实验报告基因酶（图3A）。用双荧光素酶报告基因测试系统，海洋腔肠荧光素酶的线性范围达酶浓度的7个数量级，较低的底限是≤10fg （大约3×10 -19 摩尔）的对照报告基因酶（图3B），并且这两个酶的特异活力相似。