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电子显微镜
2015-07-30
 

         

电子显微镜简称电镜,是根据电子光学原理,用电子束做为光源、用电磁透镜代替光学透镜,使物质的细微结构在非常高的放大倍数下,显示标本超微结构的显微仪器。分为透射电子显微镜和扫描电子显微镜等。透射式电镜常用于观察那些用普通显微镜所不能分辨的细微物质结构。扫描式电镜主要用于观察固体表面的形貌,也能与X射线衍射仪或电子能谱仪相结合构成

透射式电镜,因电子束穿透样品后再用电子透镜成像放大而得名。它的光路与光学显微镜相仿。在这种电镜中,图像细节的对比度是由样品中的原子对电子束的散射形成的。样品较薄或密度较低的部分电子束散射较少,这样就有较多的电子通过物镜光栏参与成像,在图像中显得较亮。反之,样品中较厚或较密的部分在图像中则显得较暗。如果样品太厚或过密则像的对比度就会恶化,甚至会因吸收电子束的能量而被损伤或破坏。

透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所產生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0.1~0.2nm,放大倍数為几万~几十万倍。透射电镜的分辨率为0.1~0.2nm,放大倍数为几万~几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备更薄的超薄切片(通常為50~100nm)。其制备过程与石蜡切片相似,但要求极严格。其制备过程与石蜡切片相似,但要求极严格。要在机体死亡后的数分鐘钓取材,组织块要小(1立方毫米以内),常用戊二醛和饿酸进行双重固定树脂包埋,用特制的超薄切片机切成超薄切片,再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。要在机体死亡后的数分钟钓取材,组织块要小(1立方毫米以内),常用戊二醛和饿酸进行双重固定树脂包埋,用特制的超薄切片机切成超薄切片,再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。电子束投射到样品时,可随组织构成成分的密度不同而发生相应的电子发射,如电子束投射到质量大的结构时,电子被散射的多,因此投射到荧光屏上的电子少而呈暗像,电子照片上则呈黑色。电子束投射到样品时,可随组织构成成分的密度不同而发生相应的电子发射,如电子束投射到质量大的结构时,电子被散射的多,因此投射到荧光屏上的电子少而呈暗像,电子照片上则呈黑色。称电子密度高。称电子密度高。反之,则称為电子密度低。反之,则称为电子密度低。

扫描电子显微镜,电子束不穿过样品,仅在样品表面扫描激发出次级电子。放在样品旁的闪烁晶体接收这些次级电子,通过放大后调制显像管的电子束强度,从而改变显像管荧光屏上的亮度。显像管的偏转线圈与样品表面上的电子束保持同步扫描,这样显像管的荧光屏就显示出样品表面的形貌图像,这与工业电视机的工作原理相类似。扫描式电镜的分辨率主要决定于样品表面上电子束的直径。放大倍数是显像管上的扫描幅度与样品上扫描幅度之比,可从几十倍连续地变化到几十万倍。

扫描式电镜的主要特点是:①不需要很薄的样品;②图像有很强的立体感;③能利用电子束与物质相互作用而产生的次级电子,吸收电子和X射线等信息分析物质成分。扫描式电镜的电子枪和聚光镜与透射式电镜的大致相同,但是为了使电子束更细,在聚光镜下又增加了物镜和消像散器;在物镜内部还装有两组互相垂直的扫描线圈。物镜下面的样品室内装有可以移动、转动和倾斜的样品台。

扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描,将產生的二次电子用特制的探测器收集,形成电信号运送到显像管,在荧光屏上显示物体。扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描,将产生的二次电子用特制的探测器收集,形成电信号运送到显像管,在荧光屏上显示物体。细胞和组织表面的立体构像,可摄制成照片。细胞和组织表面的立体构像,可摄制成照片。扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定,经脱水和临界点干燥后,再於样品表面喷镀薄层金膜,以增加二波电子数。扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定,经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜,以增加二波电子数。扫描电镜能观察较大的组织表面结构,由于它的景深长,1mm左右的凹凸不平面能清楚成像,故样品图像富有立体感。扫描电镜能观察较大的组织表面结构,由于它的景深长,1mm左右的凹凸不平面能清楚成像,故放样品图像富有立体感。

样本处理:

固定:为了尽量保存样本的原样使用戊二醛来硬化样本和使用锇酸来染色脂肪

脱干:使用乙醇丙酮来取代水。

垫入:样本被垫入后可以分割。

分割:将样本使用金刚石刃切成薄片。

染色:重的原子如比轻的原子散射电子的能力高,因此可被用来提高对比度。

 

 
 
     
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