口腔医学院张芳团队研究乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂对口腔扁平苔藓炎性反应的作用

山西医科大学口腔医院和山西医科大学中心实验室合作，通过收集口腔扁平苔藓患者的黏膜组织和体外培养人口腔黏膜角质细胞局部模拟人口腔扁平苔藓炎性环境，从体内和体外两方面研究乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂对口腔扁平苔藓炎性反应的作用。研究成果以“Role of mammary serine protease inhibitor on the inflammatory response in oral lichen planus”为题在线发表于1月24日的《口腔疾病》（Oral diseases）。

口腔扁平苔藓（OLP）是一种慢性炎症性疾病，其病因和发病机制尚不清楚。IκB激酶α（Ikkα）调节的乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（MASPIN）已被证明参与了慢性炎症过程，但MASPIN对OLP慢性炎性反应的作用尚不清楚。因此，本研究的目的是探讨MASPIN在OLP中的表达及其在炎症反应中的作用。

本研究利用免疫组化染色和Real-time PCR分别检测OLP及健康对照组中MASPIN、Ikkα的亚细胞定位和表达情况；ELISA比较OLP及健康对照组中炎性细胞因子（TNF-α，IL-6）的水平。LPS刺激人口腔角质细胞（HOKs）部分模拟OLP炎性环境，随后进行脂质体转染实验，转染MASPIN质粒和IKKα siRNA，利用Real-time PCR和Western Blot、ELISA分别检测MASPIN过表达、IKKα沉默后LPS刺激的HOKs中MASPIN、IKKα及炎性细胞因子的mRNA和蛋白表达。

本研究认为过表达MASPIN或沉默IKKα可能缓解LPS引起的炎性反应，推测MASPIN及IKKα可能参与并影响了OLP的发生发展，这为OLP的发病机制及药物治疗提供新的研究思路。

OLP病损中MASPIN表达降低，IKKα和炎性细胞因子表达升高

免疫组织化学结果显示MASPIN和IKKα在OLP组织中均呈阳性表达。其中MASPIN主要定位在OLP上皮层的胞质中。虽然IKKα在HC组织中不表达，但IKKα表达于OLP病损上皮层，细胞质亦是IKKα主要的定位部位（图1a），Real-time PCR实验结果表明，同HC组相比，MASPIN在OLP组中低表达，而IKKα在OLP组中高表达（图1b）。这些结果表明MASPIN和IKKα均参与了OLP的发病机制，且MASPIN和IKKα在OLP的炎症环境中可能是负相关关系。同时ELISA结果显示OLP组中TNF-α和IL-6的水平显著升高（图2）。

图1不同组织中MASPIN及IKKα的定位表达情况

图2不同组织中TNF-α和IL-6的表达情况

LPS刺激HOKs成功诱导了口腔炎性环境

使用不同浓度的LPS刺激HOKs24h，CCK-8和ELISA实验检测HOKs的增殖及炎性细胞因子（TNF-α、IL-6）表达情况，结果显示10μg/ ml的LPS为刺激HOKs的最佳浓度，成功诱导了口腔炎性环境（图3）。

图3 LPS刺激HOKs成功诱导口腔炎性环境

MASPIN过表达抑制了HOKs中IKKα和炎性细胞因子的表达

MASPIN质粒转染成功后24h加入LPS，于培养箱中继续培养24h，收集细胞，提取细胞总RNA、蛋白及上清，进行Real-time PCR实验、Western Blot实验及ELISA实验来检测相关基因和蛋白的表达，实验结果表明过表达MASPIN基因能够抑制LPS刺激的HOKs中IKKα和炎性细胞因子TNF-α，IL-6的基因和蛋白表达。

图4 MASPIN过表达抑制IKKα和炎性细胞因子的表达

IKKα沉默促进了HOKs中MASPIN表达，抑制了炎性细胞因子的分泌

使用同样的方法成功转染IKKα siRNA后24h加入LPS，于培养箱中继续培养24h，收集细胞，提取细胞总RNA、蛋白及上清，进行Real-time PCR实验、Western Blot实验及ELISA实验来检测相关基因和蛋白的表达，实验结果表明沉默IKKα基因能够抑促进LPS刺激的HOKs中MASPIN表达、抑制TNF-α和IL-6的表达。

图5IKKα沉默促进MASPIN表达、抑制炎性细胞因子表达

山西医科大学口腔医学院研究生徐娜为第一作者，山西医科大学口腔医院黏膜科主任张芳副教授为通信作者。该研究项目得到了山西医科大学博士启动基金和山西医科大学口腔医院科技创新基因的支持。